产品货号:
BTN90404
中文名称:
植物RNA提取试剂盒(含DNase)
英文名称:
Plant RNA Extraction Kit, with RNase-free DNase
产品规格:
50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是在植物RNA提取试剂盒基础上改进得产品,它整合了柱式原位DNase的消化步骤,用于去除植物基因组DNA污染,提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。得到的RNA可直接用于RT-PCR、RT-LAMP、Northern杂交、cDNA合成等实验。
- 操作简单快速,处理一个样品只需要约十几分钟。
- 所得RNA的OD260/280一般都在2.0左右。
- 能够有效去除多糖、多酚和基因组DNA的污染。
- 所提取RNA不含基因组DNA污染(电泳及PCR均检测不到)。
- 本试剂盒不能用于miRNA的纯化。
组分 | 规格 |
植物RNA纯化溶液A | 50mL |
植物RNA纯化溶液B | 15mL |
植物RNA纯化溶液C | 50mL |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50mL×2 |
RNase-free DNase(5U/μL) | 100μL |
10×硅胶模DNase反应液 | 250μL |
RNA洗脱液 | 10mL |
保存:室温,有效期1年,RNase-free DNase和硅胶膜DNase反应液需要-20℃保存。
氯仿
植物RNA纯化溶液A 4℃放置时可能会产生沉淀,用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
- 准备材料。每次微量提取一般需要100~200mg植物叶片、或50~100mg植物种子、或200~500mg植物果实。
- 样品破碎:
- 匀浆法:先将新鲜植物组织用剪刀剪成小块,放入10~15mL塑料离心管中,加入1mL植物RNA纯化溶液A,然后用匀浆器匀浆5~20秒。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。将1mL匀浆液转移到1.5mL的塑料离心管中,有的植物组织(比如果实)含有大量水份,匀浆液会多于1mL,转移时也只取1mL。
- 液氮研磨法(适用于复杂,易降解样品):取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中,迅速将组织研磨成粉末后,将粉末转移到1.5mL的塑料离心管中,加入1mL植物RNA纯化溶液A,立即剧烈振荡20秒,充分混匀。
- 匀浆法:先将新鲜植物组织用剪刀剪成小块,放入10~15mL塑料离心管中,加入1mL植物RNA纯化溶液A,然后用匀浆器匀浆5~20秒。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。将1mL匀浆液转移到1.5mL的塑料离心管中,有的植物组织(比如果实)含有大量水份,匀浆液会多于1mL,转移时也只取1mL。
- 在装有1mL匀浆液或研磨物的离心管中加入0.3mL的植物RNA纯化溶液B和0.2mL自备氯仿,在振荡器上振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
- 室温13000rpm离心3~5分钟,两相间将有约5毫米厚的细胞破碎物。
- 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质,避免触及或吸取。
- 加入跟上清液等体积的植物RNA纯化溶液C,充分颠倒混匀。如果有沉淀产生(对某些植物,属于正常现象),千万不要去掉沉淀。
- 将一半的混合液(包括沉淀物)转移到离心吸附柱中,13000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
- 将剩下的一半的混合液(包括沉淀物)转移到同一离心吸附柱中,13000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液,13000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。再加0.3mL通用洗柱液,13000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
- 13000rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要,否则残留的通用洗柱液会抑制后续反应中DNase的活性。
- 配制DNase硅胶模工作液:将2μL(10U)本试剂盒提供的RNase-free DNase,5μL 10×硅胶模DNase反应液和43μL RNA洗脱液混合,共50μL。
- 将DNase工作液全部50μL加入到离心吸附柱中,室温放置10~30分钟。
- 直接在离心吸附柱中加0.7mL通用洗柱液。
- 13000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
- 再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中,13000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
- 13000rpm室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇(通用洗柱液中的成分)会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中,加入50μL RNA洗脱液,室温放置2分钟。
- 13000rpm室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品。
- 所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃待用。如果要进行甲醛变性电泳检测。如果使用非变性胶电泳,则必须使用RNA专门的上样液。千万不能使用DNA上样液(因为它一般没有经过去RNase处理)。
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